Cy5-NH2 属于花菁类近红外染料的氨基衍生物，因其光物理性能、可反应的伯氨基以及良好的生物相容性，用于蛋白质、核酸、多肽及药物载体的荧光标记。xi an瑞.禧.小编整理的内容如下：
常用名：花青5胺 、Cy5标记氨基、花菁染料Cy5-氨基
英文名：Cyanine5 amine hydrochloride、CY5-amine、CY5-NH2
CAS号 ：1807529-70-9
化学结构：花菁骨架 + 活性氨基
1. 母核结构——五甲川花菁（Cy5）
两端杂环 吲哚啉或苯并吲哚啉，提供刚性与光稳定性
共轭桥 5 个次甲基（–CH=）构成的共轭链，决定吸收/发射波长 ≈ 650 nm（近红外区）
取代基 杂环氮上的烷基链（乙基/丙基/磺酸烷基），调控水溶性
磺酸基（–SO₃H） 赋予水溶性，降低非特异吸附
2. Cy5-NH2 的特点：
在其中一个杂环的烷基侧链末端引入伯氨基（–NH₂），通常通过 C2～C6 亚烷基间隔臂连接，避免氨基直接连入共轭体系导致荧光猝灭。
典型结构（磺化型）：
两个吲哚啉环 5 位各带一个磺酸基
一侧 N-烷基链末端为 –CH₂–CH₂–NH₂
反应化学
1. 核心反应：EDC/NHS 酰胺偶联（标记羧基）
这是常用的标记方式，适用于含羧基的蛋白质等分子。
活化 蛋白质 + EDC + sulfo-NHS，MES 缓冲液 pH 5.5~6.0，室温 15~30 min
偶联 调 pH 至 7.2~7.5，加入 Cy5-NH₂（DMSO 溶解），染料:蛋白 = 1:5~1:20，避光反应 2~4 h 或 4℃ 过夜
终止 加 1 M Tris（pH 7.5）淬灭
纯化 脱盐柱 / 透析 / HPLC 去除游离染料
检测 A₂₈₀ + A₆₅₀ 计算 D/P 比
注意：
禁用含伯胺的缓冲液（Tris、甘氨酸）
禁用还原剂（DTT、TCEP）及巯基化合物
2. 替代反应：还原胺化（标记醛基）
适用于糖蛋白（氧化糖链产生醛基）或醛修饰核酸。
Cy5-NH₂ + 醛基 → 希夫碱 → NaBH₃CN 还原 → 稳定胺键
CY5-NH2与相关衍生物对比
Cy5-NH2 的应用
应用方向 | 方案 | 场景 |
抗体标记 | Cy5-NH₂ + NHS-抗体 | 流式细胞术、免疫荧光、活体成像 |
FRET 探针 | Cy5（受体）+ Cy3/FITC（供体） | 高效 FRET 配对 |
核酸 FISH | 氨基化寡核苷酸 + Cy5-NH₂ | 近红外 FISH 探针 |
纳米载体 | NHS-PEG-DSPE 修饰纳米粒 + Cy5-NH₂ | 荧光示踪 |
活体成像 | Cy5 标记靶向探针，660 nm 激发 | 小动物近红外成像，穿透深 |
超分辨显微 | Cy5 用于 STORM/PALM | 需还原缓冲液配合 |
瑞禧tech小编总结分享.2026.6