小鼠胸膜间皮细胞(PlMC)原代细胞的分离简介胸膜pleura) 是衬覆于胸壁内面、膈上面、纵隔两侧面和肺表面等处的一层浆膜。被覆于胸壁内面、纵隔两侧面和膈上面及突至颈根部等处的胸膜称壁胸膜parietal pleura)覆盖于肺表面的胸膜称脏胸膜visceral pleura)两层胸膜之间密闭、狭窄、呈负压的腔隙称胸膜腔pleural cavity) 。壁胸膜依其衬覆部位不同分为肋胸膜、膈胸膜、纵隔胸膜和胸膜顶4部分。脏胸膜脏胸膜贴附于肺表面并伸入至叶间裂内因其与肺实质连接紧密故又称肺胸膜。胸膜腔是指脏、壁胸膜相互移行二者之间围成的封闭的腔隙左、右各一呈负压。胸膜腔实际是两个潜在的间隙间隙内仅有少许浆液可减少摩擦。二、材料1、实验动物: 2-3周龄Balb/c小鼠10只雌雄不限2、组织来源胸膜3、手术器材手术剪镊、解剖镊、眼科剪镊、手术刀4、消化酶0.25%胰酶5、培养基DMEM/F1210%FBS1%双抗三、实验步骤1、将小鼠断颈处死放入75酒精中浸泡消毒。2、将小鼠移入超净台内完整分离出小鼠的肺。3、用PBS漂洗肺组织将整个肺叶放入0.25%胰酶中不用剪碎37℃水浴消化20-30分钟。4、30分钟后终止消化收集酶液1000rpm离心5min去上清细胞沉淀用培养基重悬接种于6孔板或者T25培养瓶中置于培养箱中培养。5、48小时后换液以去除红细胞此后视情况1-2天换液。注意胸膜间皮细胞状态较好时可传代状态一般不建议传代。实验图片图1、2 原代培养第7天图3、4 P1代五、鉴定常用鉴定方法CK8, CK18武汉云克隆提供原创方案此方法目前仅适用于小鼠。云克隆拥有自建的SPF级实验动物中心与GMP级细胞制备平台从供体筛选、组织采集到细胞分离与放行检测全程在自有体系内完成。ISO质量体系认证已通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证。品类丰富目前已提供超过560种原代细胞产品和超过3000种细胞制剂覆盖人、小鼠、大鼠、兔、犬、猫、猪、羊等近20个物种。间皮细胞系列可与成纤维细胞、上皮细胞、平滑肌细胞等其他细胞类型搭配使用构建多细胞共培养体系。